MODIFICACIÓN TÉCNICA DE LA INMUNOHISTOQUÍMICA E INMUNOFLUORESCENCIA EN TEJIDO PULMONAR: MÉTODO RÁPIDO.
Resumen
Introducción: La inmunohistoquímica incremento la sensibilidad del marcaje con el uso anticuerpos y complementó el análisis molecular y su principio se sustenta en la reacción antígeno-anticuerpo. Algunos métodos mencionan procedimientos sumamente rigurosos, pues oscilan entre 4 horas hasta dos días. Por este motivo, decidimos realizar modificaciones de los pasos para tratar de disminuir el tiempo establecido con estos protocolos.
Objetivos: Modificar y estandarizar una técnica de inmunohistoquímica e inmunofluorescencia en parafina de tejido pulmonar con la finalidad de reproducir un método rápido y de calidad.
Materiales y métodos: Se utilizaron pulmones de ratones CD-1 (30-35g). Se realizó la eutanasia con pentobarbital sódico (i.p. 20mg/Kg). Se realizó la perfusión in vivo con solución fisiológica (0.9%), los pulmones se insuflaron con paraformaldheído 4% y fueron fijado por inmersión. Se realizó la inmunohistoquímica para a-actina y CC10. Para la inmunofluorescencia se utilizaron anticuerpos CYP1B1 y CC10.
Resultados: Inmunohistoquímica, la marca para a-actina, se observó localizada en la capa de músculo liso peri-bronquiolar y peri-vascular. La marca para CC10, solo se apreció en el epitelio bronquiolar. En el caso de la inmunofluorescencia, la marca para CYP1B1 se localizó tanto en los alveolos pulmonares como en el epitelio bronquiolar. Por último, la proteína CC10 al igual que en la inmunohistoquímica, se localizó en el epitelio bronquiolar.
Conclusiones: La inmunohistoquímica e inmunofluorescencia en parafina cumplió con las expectativas esperadas, pues fue capaz de reproducirse un método rápido y de calidad. Además, esta variación de la técnica es susceptible de modificaciones.